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如何提升CY5/CY5.5熒光成像效果之光源篇

發布時間:2025-09-17

訪問量:92

如何提升CY5/CY5.5熒光成像效果之光源篇


提升CY5/CY5.5的熒光成像效果,通常是從以下四個維度做出改進,1.攝像頭;2.熒光光源;3.熒光濾色片組;4.熒光物鏡。在上一期的文章中,我們已經分享過如何從攝像頭挑選角度提升CY5/CY5.5的成像效果,今天我們繼續講第二個維度,熒光光源。


光源如何影響CY5/CY5.5的成像效果?


CY5染料的激發光譜和發射光譜


熒光光源在熒光成像中的作用是激發熒光染料,要討論如何更好地激發熒光,就要先從熒光染料的光譜特性說起。我們看到的很多資料都會寫著熒光染料的激發波長和發射波長,這兩個數值都是峰值數值,以便描述,在峰值附近其實還有一定的范圍會有激發和發射,只是這些波段的熒光效率相對低,效果沒那么好。


理想的熒光光源,一需要光譜覆蓋熒光染料的峰值激發波長,二需要在這個波長有較高的光強,這樣才能獲得更好的激發效果,對于CY5來說這個數值大概在650nm左右,而CY5.5則在670nm左右。



汞燈光源的光譜分布


CY5/CY5.5成像效果不好,一個典型原因是常見的汞燈熒光光源并不適合CY5/CY5.5成像。通過汞燈光源的光譜圖,我們可以看到,汞燈600nm后的光譜沒有波峰,光強是比較弱的,因此理論上激發效果不會好。



汞燈實測的CY5成像光功率


而在實測中,汞燈光源在CY5波段的光功率也很明顯低于其他波段,還不到DAPI或GFP波段光功率的一半。


·傳統熱光源哪個更適合CY5/CY5.5成像?


傳統熱光源光譜特性對比


汞燈不是合適的CY5/CY5.5熒光光源,那么傳統熱光源中哪一個比較合適呢?這里對比四種傳統熱光源的光譜特性,其中鹵鎢燈為了方便在圖上呈現,呈現的數值是在實際數值基礎上做了10倍放大,也就是說,雖然鹵鎢燈優勢光譜集中在600nm后的區域,但光強太低,并不適合做熒光光源。



氙燈實測的CY5成像光功率


氙燈是傳統熱光源中更適合CY5/CY5.5的選擇,它跟汞燈都屬于高壓弧燈,穩定性比汞燈好,壽命可以到1000-2000小時,有著近似太陽的連續光譜、均勻光強,實測CY5的激發光功率大約可以到汞燈的2倍,但同時功率要到汞燈的1.5倍,且發熱大,另外DAPI波長的激發效果也比較差。


·更值得推薦的CY5/CY5.5激發光源:LED熒光光源


LED熒光光源激發的CY5


傳統熱光源用于CY5/CY5.5成像有其局限性,目前成像效果比較好的有兩種光源,一種是搭配共聚焦/全內反射使用的激光光源,一種是適合普通熒光顯微鏡的LED熒光光源。LED熒光光源是更適合大部分用戶的選擇。



四通道光源MG-120的部分可選光譜


四通道光源MG-120可以按需配置4個LED熒光通道,每個通道獨立控制、獨立記憶光強,通過選配R波段激發配置,可以實現汞燈3-5倍的CY5/CY5.5激發效果,優于氙燈,同時DAPI激發效果也優于氙燈,更能全面滿足各種熒光染料激發需求。



MG-120壽命更長,效果更好


此外,基于LED技術的MG-120作為熒光光源,不僅相比汞燈和氙燈熒光光源功耗低、發熱小、光強可調節,其使用壽命也可以達到5萬小時,遠勝于汞燈和氙燈,大大降低了設備維護的人力成本和時間成本,讓實驗室得以更高效運行。

熒光光源對比


汞燈

氙燈

四通道光源MG-120

功耗

100W

150W

72W

發熱

高溫燙手

高溫燙手

安全溫度

壽命

200小時

1000-2000小時

50000小時

光強

不可調

不可調

可調

需要預熱

不需要

CY5激發

一般

DAPI激發


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